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第一节 细胞生物学的研究对象和范围
细胞生物学是从细胞整体、超微结构和分子水平上研究细胞的结构和生命活动规律的学科。
细胞——是一切生物的基本结构单位，它是由膜围成的能独立进行繁殖的最小原生质团。
        显微结构：在光学显微镜下细胞的结构
        亚显微结构：超微结构, 电子显微镜下细胞的结构
        细胞的功能
        物质的吸收与分泌、合成与分解、增殖与分化、衰老与死亡、信息传递与转导以及遗传与变异等等
第二节 细胞生物学的发展简史
        最早发现细胞的是Robert Hooke
        第一次（1674年）观察到活细胞的是A.V.Leeuwenhoek
        1838年，德国植物学家Schleidon提出：所有的植物体都是由细胞组合而成的
        1839年，德国动物学家T.Schwann认为：动物体也是由细胞组成的，并肯定一切生物体都是由细胞组成的
        二人的观点就是著名的“细胞学说”（cell theory)， M.Schleidon和T.Schwann同时成为细胞学说创始人。
        1855年，德国病理学家R.Virchow提出：“细胞来自细胞”，对细胞学说做了重要补充。
“细胞学说”主要内容
        细胞是多细胞生物的最小结构单位，对单细胞生物来说，一个细胞就是一个个体；
        多细胞生物的每一个细胞即是一个活动单位，执行特定的功能；
        细胞只能由细胞分裂而来。
        原生质学说——细胞是有膜包围的原生质团
        1885年，W.Flemming发现并提出有丝分裂
        1905年，J.E.Moore等发现并提出减数分裂
        O.Hertwig 1892年发表了《细胞与组织》的著名著作 ，这一著作标志着细胞学（Cytology）作为一门独立的生物学科的建立。
    第二章  细胞生物学研究方法
        第一节  形态结构
        一、光学显微镜
        （一）普通光学显微镜
        影响显微镜成像清晰度最关键的因素是显微镜的分辨率
        分辨率是指显微镜能将相近的两个质点分辨清楚的能力         
              分辨率（resolution）公式：D= 0.61 / N.A.
            D—— 分辨率 —— 光波波长  N. A. —— 镜口率（数字孔径） N. A. =N • Sin  /2  
        （二）特殊显微镜暗场显微镜
        原理：显微镜加装特殊装置，使直射光不能进入物镜，只允许被标本反射、衍射的光线进入物镜
        特点：视野的背景是暗的，样品是的边缘是亮的。
        特殊装置：在聚光器中加装中央遮光板或者使用暗视野聚光器
        相差显微镜（ phase contrast microscope）
        二、电子显微镜
        电子显微镜以电子束代替了可见光，大大提高了显微镜的分辨率，可以观察细胞的亚显微结构
电镜与光镜的主要区别：
                           光学显微镜      电子显微镜  
            光源            可见光             电子束
            介质        空气（香柏油）        真空
          聚光镜         光学透镜             电磁透镜
         分辨力           0.2um               0.1nm
        放大倍数         1000倍              百万倍  
        电子显微镜主要种类：
        透射式电子显微镜(TEM)  主要用于观察标本内部细微结构
        扫描式电子显微镜（SEM) 主要用于观察标本表面形态结构
        扫描隧道显微镜（STM）
        电镜技术：冰冻断裂和冰冻蚀刻
        冰冻断裂和冰冻蚀刻电镜技术目的：主要用于研究生物膜内部结构
        主要步骤：
        冰冻标本（-1000C干冰或-1960C液氮），冷刀断开标本（冰冻断裂），升温，冰升华，断裂面结构暴露（蚀刻），表面喷一层蒸汽碳和铂，将组织溶掉，碳和铂的膜称复膜（replica），电镜下观察复膜，复膜构造=标本构造

        第二节  生物化学分析
        一、组织化学法
        *利用染色的方法进行原位分析
        * 福尔根（Feulgen）反应：鉴定DNA
        *PAS反应（高碘酸席夫反应）：鉴定多糖类物质
         二者皆有醛基与Schiff试剂反应，生成红色化合物
        二、免疫细胞化学
        特异蛋白抗原的定性与定位
        方法：原位分析 ；体外蛋白质分析★
        原位分析 ：免疫反应 ：
        直接法：Ag+Ab*镜检；间接法：Ag+Ab1+ Ab2*镜检。*代表标记物
        标记物可以为多种：
        荧光素─免疫荧光技术或称荧光抗体法，酶─酶标抗体法，放射性同位素标记—放射自显影，铁蛋白标记，免疫胶体金技术
        （二）体外蛋白质分析
        蛋白质印迹法（Western  blotting）
        技术路线 ： （图）
        样品制备—样品分离—样品转移—免疫反应——检测
        蛋白质由SDS聚丙烯凝胶硝酸纤维素膜转移的过程即为印迹（blotting）
        *仪器：流式细胞计—flow  cytometer
        *特点：细胞是高速运动的
        *主要应用：
         用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量；测定细胞群体中不同时相细胞的数量；从细胞群体中分离某些特异染色的细胞；分离DNA含量不同的中期染色体；混合细胞分离 。
        五、超离心技术（ultracentrifugation）
        高速离心：10000—25000r/min；超速离心：转速大于25000r/min
         沉降系数（ “S”—Svedberg  unit）: 单位离心场中溶质分子的沉降速度 。1S 相当于110-13s
离心目的：分离细胞器与生物大分子及其复合物

cynthiagg

万分感激~~~~

kankan999999999

        离心种类：
        分析离心：用于分析和测定制剂中的大分子的种类和性质等
        制备离心
        差速离心：分离密度不同的细胞组分
        密度剃度离心：精细组分或生物大分子的分离（介质蔗糖、氯化铯）
        六、分子杂交技术
        细胞内特异核酸的定性定位
        光镜水平的原位杂交技术——同位素标记或荧光素标记的探针
        电镜水平的原位杂交技术 —生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合
        体外分析核酸的主要方法：Southern  blotting又称DNA印迹法；Northern  blotting又称RNA印迹法
        分子杂交（molecular hybridization）是利用DNA高温变性、低温复性原理形成杂交分子的过程
        杂交分子形式：DNA—DNA；DNA—RNA；RNA—RNA
        原位杂交是在分子杂交基础上建立起来的
        七、PCR技术
        聚合酶链式反应；引物：寡核苷酸链；原料：d NTP；酶：DNA聚合酶（耐高温）
        第三节  细胞生理学技术
        1、膜电位检测技术
         细胞内外存在电位差（20~100mV）称为膜电位，膜电位的变化反应了细胞的生理变化
        2、膜片钳位记录技术
        主要用于检测单个特定离子通道性  质及变化
        3、细胞电泳
         细胞表面带有许多电荷，因而可以在外加电场的作用下移动
        第四节  实验操作技术
        （一）动物细胞培养
        细胞培养主要方式
        克隆培养（clonal culture）：克隆又称无性繁殖系或无性系
        群体培养（mass culture）
        体外培养细胞生长特点：单层细胞培养
          贴壁生长；接触抑制现象
        转鼓培养法
        为了大量获取细胞而使细胞始终悬浮不贴壁的培养方法
        细胞培养相关概念：
        原代培养（primary  culture）：从机体中取出细胞后直接培养，得到原代细胞（一般指分裂10代以内的细胞）。
        分离细胞的主要方法★
        传代培养（sub—culture）：适合在体外进行的持续性培养，传代培养的细胞称传代细胞。
        细胞株（cell strain）在培养过程中仍然保持其特征（二倍体）及接触抑制的传代细胞。
        细胞系（cell line）在培养条件下发生突变后可以无限增殖的细胞群，接触抑制丧失。
          例：HeLa细胞系；CHO细胞系

zqsunny

我的天哪，正在发愁呢，顶！！！

zqsunny

只有第一二章么……[em:15]
不知道怎么办啊~

niuzubiao

只有这两章么？

onlyjunfei

就两章？[em:15] ~不过还是顶一下

kaixinjinguo

xiexie

ming693

楼主好人啊！

向北的列车

谢谢 学长