生化高手请教下啊！

雨后虹 · 发表于 2014-12-6 00:12

Race技术在反转录成cDna后，又加的两个引物說的巢式pcr，具体是怎么的？

asuka2015 · 发表于 2014-12-14 17:12

本帖最后由 asuka2015 于 2014-12-16 09:38 编辑

我现在有事情，简单给你提示一下。
RACE是分别用PCR扩增出从一个基因（是mRNA，先要把它反转录成为DNA）的5'末端到基因中间的某一个已知部分序列的片段和从一个基因的3'末端到基因中间的某一个已知部分序列，然后把两者连接到一起。基因中间的某一个已知部分序列是事先知道的，不然我们拿什么去筛选基因？总要有点依据吗。PCR可以执行的条件是什么？必须知道要扩增DNA的的5'末端3'末端的序列，怎么着也要知道要扩增DNA的的5'末端序列和3'末端的序列的十几个碱基的序列，不然怎么设计引物？那么我们把要扩增的DNA全部测序不就解决了吗?可问题是测序也同样要花钱，而且直接用RACE，不仅不用测序，还能直接扩增到目的基因，我们何乐而不为？
我们就知道这段需要扩增的DNA（特定的基因）的中间的某一部分的一些序列（大约能够有十几个碱基），而且这个中间部位具体距离该基因的5'末端序列和3'末端的序列到底有多远，也不知道，瞧这倒霉催的。那怎么办？我们就用需要扩增的DNA（特定的基因）的中间的某一部分的一些序列（大约能够有十几个碱基）分别用作5'和3'的引物序列分别往基因的两边扩增，用PCR，因为引物在DNA的内部，所以两次都是巢式PCR出两段DNA片段。那可是另一端因为我们也不知道呀，怎么用PCR。既然原来的DNA的5'和3'末端序列我不知道，那么我们不会用自己知道的序列吗？！人为地在原来的DNA的5'和3'末端序列分别接上一段已知的序列不行呀，而且mRNA还有个多聚A尾，其反转录为DNA，对应为多聚T头吗。相对于mRNA头的DNA序列，还是没有戏，我们索性自己接上已知序列的头，再PCR就行了呗。

asuka2015 · 发表于 2014-12-14 17:13

论坛有去审查了！什么破论坛！

asuka2015 · 发表于 2014-12-14 17:23

本帖最后由 asuka2015 于 2014-12-14 18:09 编辑

只要我回答问题的内容多一点或者有英文，论坛就要去审查，管论坛的人就这样搞，论坛的前景会很差！

雨后虹 · 发表于 2014-12-14 23:46

asuka2015 发表于 2014-12-14 17:23
只要我回答问题的内容多一点或者有英文，论坛就要去审查，管论坛的人就这样搞，论坛的前景会很差！ ...

感觉有一点点的懂了，谢了啊！！

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雨后虹 · 发表于 2014-12-14 23:46

雨后虹发表于 2014-12-14 23:46
感觉有一点点的懂了，谢了啊！！

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雨后虹 · 发表于 2014-12-15 00:18

asuka2015 发表于 2014-12-14 17:23
只要我回答问题的内容多一点或者有英文，论坛就要去审查，管论坛的人就这样搞，论坛的前景会很差！ ...

学姐，再问下，抑癌基因的鉴定策略，问答题

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asuka2015 · 发表于 2014-12-15 00:28

我回答过，在回答一次。
这个问题实际上是基因功能的检测问题，主要可以分为实验检测和生物信息学检测两大来，实验检测无非是基因敲除、基因敲入、基因过表达，然后看看实验动物或者离体细胞的表型变化，也可以使用基因的异位表达，比如在没有此种基因的工程细胞中导入此类细胞的表达载体，比如导入到酵母细胞里，观察细胞的表型变化，有时候直接观察表型变化不容易，那么就观察该基因表达后的下游的蛋白质是哪些，有没有出现与已知的细胞的抑癌基因的特异性的蛋白质或者基因表达的网络和细胞信号传导特异性网络相同的网络。
从生物信息学角度预测基因功能，主要是顺式元件、编码区序列、编码产物的序列等与已知的抑癌基因的同类元件有类似和相同的角度加以预测。

asuka2015 · 发表于 2014-12-15 00:34

没有答完，我的回答有10666个字。

asuka2015 · 发表于 2014-12-15 00:57

抑癌基因的鉴定策略（asuka2015回答）.pdf (206.72 KB, 下载次数: 31)

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刚才找吃的去了，我晚饭吃的不少，但是实在饿了。

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