求解一道题

nipeijun

用羧肽酶A水解一个肽，发现释放最快的是Leu，其次是Gly，据此可断定，此肽的C端序列是Gly-Leu。
这道判断题是对是错？原因是什么，求指点

asuka2013

羧肽酶A能够从肽链的羧基端逐个水解下来除Lys,Arg,Pro之外的其他所有氨基酸，并且释放为游离氨基酸，羧肽酶在稀SDS或6M脲溶液中均有活性，即羧肽酶能够对于变性的蛋白质作用。释放为游离氨基酸的数目和种类时间而改变，自动氨基酸分析仪做定性或定量测量，然后根据氨基酸释放的动力学曲线，以时间为横坐标，释放的氨基酸量（摩尔数）为纵坐标作图，可确定该肽的羧基端的序列。所以此题应该是对的。当然具体试验时还要考虑更多的因素，这里说的是实验的理想情况。

nipeijun

asuka2013 发表于 2012-12-31 18:04
羧肽酶A能够从肽链的羧基端逐个水解下来除Lys,Arg,Pro之外的其他所有氨基酸，并且释放为游离氨基酸，羧肽酶 ...

多谢 网上的答案既有对的， 又有错的，书上也没有细讲。

asuka2013

补充一下:此题并不严格，应该是“用羧肽酶A水解一个肽，反应开始后较短时间内，发现释放最快的是Leu，其次是Gly，据此可断定，此肽的C端序列是Gly-Leu。”
因为，如果时间比较长了，那么如果多肽是"...Leu-Leu-Gly"，或者Leu残基更多，也有可能出现释放最快的是Leu，其次是Gly的情况，因为有些多肽的羧基末端的Gly已经被水解掉了而暴露出了相邻的Leu残基，有些还没有，另有些多肽甚至水解掉了羧基末端的Gly残基和一相邻的Leu残基而在水解从羧基末端算起第二个Leu残基。不过，我觉得作为1分的判断题，太多的陷入实验细节没有太大意思，如果是问答题或者实验题到可以如此分析，因为可以看出考生的思维能力。

asuka2013

实际上，现在没有什么人用羧肽酶去测序，用串联质谱对多肽测序连修饰基团都能测出来，用基于Edman降解原理的自动测序仪对于多肽测序也很方便。

asuka2013

二楼的回答我是基于：陶慰孙、李惟、姜涌明 主编，蛋白质分子基础，高教出版社，1995，第二版，回答的，该书也说明此回答是理想情况。

四楼的回答是基于蛋白质酶解的具体实验现象。

综合起来，正确答案应该是否定。我在二楼的答案应该是不对的。

nipeijun

asuka2013 发表于 2012-12-31 23:16
二楼的回答我是基于：陶慰孙、李惟、姜涌明 主编，蛋白质分子基础，高教出版社，1995，第二版，回答的，该 ...

多谢，此题太老，而且也不严密，我估计也不会再考了。