生化问题求赐教

芷杉︶ㄣ

是2011年中科院的考题。
1、一个50K的蛋白质用DTT处理后用SDS-PAGE处理，分子量变为25K，是什么原因？

2、DNA为什么保存在盐溶液中。

求高人详细解答一下{:soso_e121:}

david0308

第一个问题是因为这个蛋白是同源二聚体，由二硫键连接的；第二个问题就比较难办了，dna不一定要保存在盐溶液里啊，只不过DNA高盐浓度溶解低盐析出而已，个人是这么认为的，我们实验室提出的质粒 DNA啥的一般用双氧水保存的。

沈慕容

看课本

omegalong

这个是搜来的，第2题的答案，个人认为很有道理，也不知道你看到没，总之发上来看看。

       DNA存在纯水中没有在盐溶液中稳定，保存的时间不够长，易降解；但保存在盐溶液中对于后续的有些实验会有影响。短期用一般保存在纯水中。

       DNA在纯水中易变性原因：每一个核苷酸的磷酸基上都带有一个负电荷。如果这些负电荷没有被中和，双链之间的这种强有力的静电排斥作用将驱使两条链分开(在同一条链内虽然也存在着这种静电斥力，但由于链内的共价键，这种静电斥力并不重要)。但是当有盐类加入时，这些带负电荷的磷酸基团可以被正离子(如Na+)所中和，也就是正离子围绕在磷酸基周围形成了"离子云"，有效地屏蔽了磷酸基之间的静电斥力。这就是Debye-Hvckel 离子屏蔽理论。

       在生理盐浓度(约0.2mol/L)时就发生了这种屏蔽作用。斥力也被中止。当离子浓度降低时，这种屏蔽作用减弱，斥力增大，因而Tm值随之降低。事实上，纯蒸馏水中的DNA在室温下就会变性，也就是这个缘故，所以还需保存在-20℃延缓变性。在超过生理盐浓度时，Tm值仍然随着离子强度的增加而上升，这是因为在高盐浓度下碱基的溶解性降低而增加了疏水作用力，促进了双螺旋结构的稳定。

asuka2013

1、一个50K的蛋白质用DTT处理后用SDS-PAGE处理，分子量变为25K，是什么原因？
答：SDS会引起蛋白质变性，使得蛋白质的亚基解离为单个亚基；DTT是二硫苏糖醇，会还原S-S为巯基，进而拆开二硫键的链接：（1）拆开不同肽链之间的二硫键链接，使得二硫键链接的肽链断裂，（2）DTT也还原链内二硫键使得蛋白质的空间结构松弛。
所以本题有两种可能性：其一，50K的蛋白质，由两个25K的亚基构成，SDS处理后，成为两个25K的亚基，SDS-PAGE测定的是两个25K的亚基的相对分子量。此时DTT处理50K的蛋白质有助于打开亚基内部的二硫键，使亚基更易被SDS变性。
第二种可能性：50K的蛋白质由两个25K的肽链构成，而且两条肽链之间由二硫键共价链接，而不是由次级键链接，DTT是二硫苏糖醇，会还原S-S为巯基，进而拆开二硫键的链接，使50K的蛋白质之成为两个25K的独立的肽链，这样SDS-PAGE测定的是两个25K的立的肽链的相对分子量。

2、DNA为什么保存在盐溶液中。
答：DNA有负电荷，需要正离子中和，以便降低彼此斥力，楼上答得很好，我不用在费口舌了。