sds-page后怎么去除sds？

江哥v587

sds-page后怎么去除sds？

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伊甸渊

透析。蛋白质不能通过半透膜。

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江哥v587

伊甸渊 发表于 2014-11-29 21:15
透析。蛋白质不能通过半透膜。

soga

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伊甸渊

江哥v587 发表于 2014-11-29 21:16
soga

哥。咱外语不好→_→

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江哥v587

伊甸渊 发表于 2014-11-29 21:17
哥。咱外语不好→_→

这是拼音～～

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asuka2015

要看你的蛋白质样品是在溶液里，还是在完成了电泳的SDS-PAGE的凝胶里，如果是在溶液里，超滤、透析就可以去掉蛋白质里的SDS，不怕麻烦用层析也可以。

如果是在在完成了电泳的SDS-PAGE的凝胶里，则要：SDS 凝胶分离蛋白质，用预冷的0.25mol/L KCl染色，需要5-10分钟，蛋白质会变为白色。然后用干净的刀片先切下含有目的蛋白质带的凝胶块，置于蒸馏水中侵泡至回复透明，需要5-10分钟。再将凝胶带取出，放入离心管，用无菌的（高温高压灭菌的）镊子或无菌吸头将凝胶捣碎，加入3-5体积的PBS缓冲溶液，4度时过夜。第二天用吸管吸走全部PBS缓冲溶液（抽提液）放置到新的EP管中，再加入大致同等体积的PBS缓冲溶液抽提，时间数小时即可，再把新的抽提液加入第一次放置到抽提液的EP管中。对于EP管中的抽提液用丙酮沉淀、冷冻干燥即可得到SDS PAGE中的比较纯的目的蛋白质。

asuka2015

呵呵。。。说多了，只是因为遇到有人问如何在变性凝胶电泳后如何回收蛋白质问题的实验操作，所以发帖回答，可能发在这里不合适吧。

江哥v587

asuka2015 发表于 2014-11-30 17:54
呵呵。。。说多了，只是因为遇到有人问如何在变性凝胶电泳后如何回收蛋白质问题的实验操作，所以发帖回答， ...

膜拜，太专业了，实验没怎么好好做过，驾驭不了啊，只能大概知道方法是什么原理～～

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伊甸渊

asuka2015 发表于 2014-11-30 17:53
要看你的蛋白质样品是在溶液里，还是在完成了电泳的SDS-PAGE的凝胶里，如果是在溶液里，超滤、透析就可以去 ...

我能弱弱的问一个么。实验室我师兄他们用试剂盒提RNA时。也是先跑胶。再找到需要的条带切下来。接着用试剂盒先把它溶解后离心。就把胶*看你那一大堆流程晕了。想问的是。这个步骤在SDS-PAGE里不能用吗？求解

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asuka2015

现在回收凝胶里的蛋白质的商用试剂盒很多，我只是举出一例而已，而且你说的是提取RNA。另外，我不懂楼上的伊甸渊到底想说神马？