最后一题求解

蓝DE汐 · 发表于 2014-12-10 21:27

asuka2015 · 发表于 2014-12-13 17:17

你能不能把图片放正呀？

asuka2015 · 发表于 2014-12-13 17:25

第一问：细胞蛋白质定位的问题。
如果被研究的蛋白质的或肽分子能够进入细胞（首先可以选择人类或者高等动物的消化道细胞），则确定其在细胞中的具体定位。这一实验可以用荧光探针方法。荧光探针在生物学研究中具有特别的重要性，荧光光谱学在生命科学的交叉研究历史表明：新型的荧光探针的每一次技术突破都会大大促进生命科学的发展。我们可以用两种办法加以研究：（1）用荧光分子标记，可以用GFP、YFP之类的发出荧光的蛋白质标记蛋白质（形成融合蛋白质），但是需要对于所研究的蛋白质的基因与GFP、YFP之类的发出荧光的蛋白质融合表达，比较麻烦，而且不适用于肽分子。所以可用能够发出荧光的有机小分子与蛋白质的或肽分子形成共价键加以标记。
（2）用荧光量子点对于蛋白质进行标记，一般需要偶联上抗体以便在活细胞内识别特定的分子。量子点(quantum dot)技术作为新型的高敏感度的探针在基因表达调控、病毒或细菌等病原生物与宿主细胞相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用、细胞信号调控、蛋白质的精细结构解析和生物技术制药等诸多生命科学前沿研究中有广泛应用。量子点是纳米生物学的重要的一种研究技术。量子点是直径1-100纳米的半导体颗粒，能够被激发产生荧光，主要由II-VI族或III-V族元素组成。比如CdX（X是S、Se、Te等元素），作为荧光探针核心（core)，其表面包裹上CdS、ZnS等作为壳层(shell)。CdS、ZnS等组成的壳层的外表面用三辛基氧化磷、巯基乙醇、十六胺等长链末端带有氧原子或者氮原子的有机分子包被，有机分子的长链末端带有氧原子或者氮原子与壳层中的未饱和的金属原子构成配位键，进而在壳层外包裹了一层疏水层，如此量子点的基本结构就形成了。用量子点一般不会影响蛋白质的内吞，而且有时候为了使量子点而人为地用可以被细胞内吞的蛋白质与量子点共建连接，使得量子点进入细胞内部。但是量子点对小肽一般而言还是太大了，可能会影响小肽的内吞。以上这些进入细胞内部的荧光标记的定位效果都能够荧光显微镜和激光共聚焦显微镜加以观测。
(3)用免疫胶体金标记上特定蛋白质的配体或者抗体，然后通过显微注射进入活细胞，而后直接用电子显微镜观测细胞观察免疫胶体金的具体位置，即可显示出与其相互作用的蛋白质在细胞中的具体的空间位置。
有关显示显示信标需要接上包装入溶酶体的特异性序列。
(4)对细胞进行粉碎，然后分级分离，再用特定蛋白质的配体或者抗体制备成的亲和层析柱进行各种不同的分级分离的细胞成分进行pull-down，进而可以获知目的蛋白质在细胞中的特定空间。
（5）用生物信息学软件模拟蛋白质的生物功能，预测其是否在细胞特定位点出现。
比如用SWISS-model。
第二问：引导多肽定位与转运的序列的检测的问题。首先有生物信息学软件进行模拟和预测，引导多肽定位与转运的序列的可能序列，然后用突变方法去掉，看看是否还能成功定位，再在不进入特定的细胞区室的多肽或者蛋白质上接上这些引导多肽定位与转运的序列的可能序列，看看后者是否被引导和定位至特定的细胞区室。